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农药残留的酶活性抑制与免疫分析技术的免疫分析法(三)

时间:2019-03-05 18:34:04 来源:时时彩十大信誉的平台 作者:匿名



抗原和抗体是否需要非共价结合力,并且力的大小与两个分子之间的距离密切相关。只有当两个分子广泛接触并精确地“配合”时,非共价键力才能起作用。距离越近,距离越近。力量越大。抗原和相应抗体之间的高度空间互补结构提供了发挥这些结合力的条件。

2.抗原和抗体亲和力和亲和力:在免疫化学中,术语“亲和力”和“亲合力”通常用于表示抗原 - 抗体结合能力。

亲和力是指抗体分子上的抗原结合位点与相应的抗原决定簇的相容性和结合力。

亲和力是指复合抗原与反应系统中相应抗体之间的总结合力。亲和力与亲和力有关,并且还与抗体的结合价格和抗原的有效决定簇的数量有关。例如,IgM分子与相应抗原的亲和力是其五种单体的亲和力的总和。复合抗原与相应抗体的亲和力是多克隆抗体系统中多重亲和力的总和,而在单克隆抗体反应系统中,只有一种决定因子起作用,因此单克隆抗体对相应抗原的亲和力通常优于单克隆抗体。多克隆抗体很弱。

3.抗原 - 抗体反应过程将抗原和相应的抗体混合并出现可见的反应,并且该过程经历一系列化学变化和物理变化,包括抗原特异性结合和非特异性结合的两个阶段,即亲水性将胶体变为疏水胶体的过程。

抗体分子是球蛋白,并且许多抗原是形成亲水胶体的蛋白质或其他大分子。在正常的血清学反应条件下,极化的水分子在它们周围形成水合层,变成带负电荷的亲水胶体,因此不会自聚合形成沉淀物。当抗原与抗体结合时,与水接触的抗原 - 抗体复合物的表面积减小,表面电荷减少,水合层变薄,并且胶体的稳定性降低。上述过程直接由抗原与抗体的特异性结合引起,这可以在几秒钟内完成并迅速达到平衡,但不会发生可见的反应。如果反应体系中存在电解质(通常存在),则抗原 - 抗体复合物的水合层被完全破坏,疏水性胶体容易聚集在一起形成大的可见抗原 - 抗体复合物。该过程是非特异性反应,其缓慢且需要数分钟,数小时或甚至数天,并且该非特异性反应受抗原与抗体的比例和环境条件(例如,pH,温度等)的影响。4,抗原 - 抗体反应的类型根据抗原 - 抗体反应产生的现象和结果,传统的血清学反应分为五种类型:1可溶性抗原的沉淀反应与相应的抗体结合;

7颗粒抗原与相应抗体结合的凝集; 3抗原活化的细胞溶解通过与抗体结合; 4通过细菌外毒素中和或结合相应的抗体中和; 5免疫标记抗原 - 抗体反应,这是现代免疫技术的重要发展和农药残留免疫分析技术的基础。

5,抗原 - 抗体反应的特点

(1)特异性:特异性是抗原 - 抗体反应的最重要特征,其由抗原决定簇和抗体分子的高变区之间的空间结构的互补性决定。抗体分子的N-末端可变区可以形成大小约3nm×1.5nm×0.7nm的凹槽,其中高变区中氨基酸残基的可变性使得凹槽的形状不断变化,并且只有与其空间结构互补的抗原决定子才能使楔形嵌入像锁和钥匙一样。因此,抗原 - 抗体结合反应是高度特异性的。许多抗原在组成上是复杂的并且含有多种抗原决定簇。如果两种不同的抗原分子具有相同或相似的抗原决定簇,则可以与彼此对应的抗体交叉反应。

(2)比例性:比例性是指抗原与抗体之间的可见反应受到一定的量比关系,并且只有当两者的浓度比合适时才发生可见反应。以沉淀反应为例,当将一定体积的抗体连续加入一排管中依次加入一定浓度的抗原时,发现随着抗原浓度的增加,沉淀迅速增加,但是在一定范围内,沉淀速率和沉淀量随着抗原浓度的增加而迅速下降,甚至在最后也不会发生沉淀。沉淀反应速率反映了参与反应的抗原和抗体浓度的适合性。当适用度高时,反应快,反之亦然。以最快的沉淀速率将抗原与抗体浓度的比率称为最佳辐射,也称为抗原 - 抗体反应的等效点。实验表明,在相同的抗原 - 抗体反应体系中,无论抗原和抗体浓度如何变化,沉淀反应的最佳比例总是恒定的。在最佳反应条件下,抗原抗体理论上全部结合,上清液中几乎没有游离抗原和抗体。事实上,当抗原略微过量时形成的沉淀物是最大和最大的。当抗原 - 抗体浓度比超过该范围时,沉淀速率和沉淀量迅速降低,甚至不发生沉淀。根据定量沉淀反应,抗原 - 抗体反应可分为三个区:1个等价区; 2抗体过量带,又称前带; 3抗原过量带,又称后带(Postzone)。

天然抗原大多数是多价的,抗体至少有两种化合价。根据网络理论,当抗原和抗体以等同的条带组合时,它们彼此交叉形成网络,该网络容易沉淀形成宏观复合物。当抗原或抗体过量时,过量的结合价不饱和,只能形成小的网格复合物,并且反应体系中存在残留的游离抗原或抗体。当抗原或抗体是单价时,无论抗原与抗体的比例是否合适,都不会发生宏观反应现象。

(3)可逆性:可逆性是指抗原和抗体形成复合物并且在某些条件下可以解离以返回游离抗原和游离抗体的性质。由于抗原 - 抗体反应是分子表面上的非共价键,所形成的复合物不强并且可以在某些条件下解离。解离后,抗原或抗体可以与其他相应的抗体或抗原重组,在整个反应系统中实现动态平衡。平衡反应的倾向取决于抗原和抗体的亲和力,抗原和抗体的浓度,环境因素等。

在适当条件下解离免疫复合物后,游离抗原或抗体保留原始的物理和化学特征和生物活性。该特征可用于分离和纯化特异性抗体或抗原,其是抗原或抗体配体。免疫亲和层析技术的基础。

6.影响抗原 - 抗体反应的主要因素。抗原 - 抗体分子的亲和力和非共价键力简单地用于确定抗原 - 抗体的亲和力。抗原和抗体的组合也受到其他反应物和环境因素的影响。影响。(1)反应物本身

1抗体的来源和类型:抗体的特异性和亲和力是抗原 - 抗体反应中的两个关键因素。来自不同动物个体的抗血清具有不同的免疫反应性。在动物免疫的早期阶段获得的抗血清更好,但亲和力更低。在免疫后期获得的抗血清通常具有较高的亲和力,但长期免疫往往使抗体的抗体类型和反应性复杂化。单克隆抗体是高度特异性的,但它们较低的亲和力通常不适合沉淀或凝集反应。

2抗原和抗体的浓度:在抗原 - 抗体反应中,抗体的浓度对应于抗原。为了获得良好的反应效果,通常采用方阵(水平和垂直交叉)实验方法筛选抗原和抗体的最佳浓度组合,以获得最佳的实验结果。

3抗原的特征:抗原的物理和化学性质,抗原决定簇的数量和类型可以影响抗原 - 抗体反应的结果。例如,可溶性抗原与相应抗体的反应类型是沉淀,并且粒状抗原的反应类型是凝集,并且单价抗原和抗体的组合不太可能显示出可见的反应。

(2)环境条件

1反应介质的pH:合适的pH是有助于抗原 - 抗体反应的正确结果的另一因素。抗原 - 抗体反应通常在pH为6至9的反应介质中进行。超过该范围,无论是过高还是过低,都可直接影响抗原 - 抗体反应性,导致假阳性或假阳性。否定结果。

参考:农药残留分析

相关链接:

农药残留酶活性的抑制及免疫分析技术的免疫分析(I)

农药残留酶活性的抑制及免疫分析技术的免疫分析(II)

[关键词]农药残留,酶活性抑制,免疫分析,国家标准物质网络

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